Homogeneizador ultra-sônico

Perguntas frequentes sobre células quebradas http://www.scientzbio.com/

Quais são as condições para sonicação de Streptomyces (actinomicetos)?

Analítico: os actinomicetos pertencem à porcentagem molar (G + C) (% molar) do grupo ramificado Gram-positivo (Eubacteria) na árvore filogenética do sistema procariótico, que possui as características moleculares e biológicas exclusivas dos procariontes. No entanto, em seus diferentes grupos, a composição química da parede celular varia muito.

No ultrassom de E. coli, 400W é usado, e o método de quebra de 5s por 5s é efetivo, mas é usado em Streptomyces, e não tem efeito devido à diferença na composição da parede celular. O tratamento pré-fiação de Streptomyces (actinomicetos) é geralmente configurado para uma determinada concentração de suspensão bacteriana. As condições específicas para o esmagamento usando o disruptor de célula ultrassônica são: coletar as bactérias na solução de cultura de 24 h a 5.000 rpm por 5 min para coletar as células; lavando com um tampão Na2HPO-aH2PO pH 7,5 3 vezes, e depois As células foram formuladas numa suspensão bacteriana 1: 3 utilizando o tampão. Colocado em um tubo de ensaio de plástico grande de 40 mL; coloque o tubo grande de ensaio de plástico em um banho de gelo e esmague-o com um desregulador ultrassônico (potência de 200W, sonda de 1/2 ", esmagamento por 30s, 30s intermitente); solução de moagem a 12 000 r / min Centrifugue em alta velocidade por 30 min, recolher os restos celulares e sobrenadante.Lavar as células também pode ser lavado uma vez com solução salina pré-resfriado ou Tris-HCl em pH 8. Além disso, a dose ultra-sônica varia muito com a quantidade de amostra e bactérias.A potência pode ser de 400- 600w, triturado por 5s, parado por 5s, banho de gelo, e a concentração final de 1 mM de PMSF é adicionada.A fim de determinar a intensidade e freqüência ultra-sônica apropriada, é necessário verificar se as bactérias estão completamente quebradas a qualquer momento.