Como usar uma pistola de genes

1. Preparação do material

Uma camada fina de meio foi colocada em um prato de cultura de 9 cm2 e o material (geralmente embriões imaturos, embriões maduros, pequenos calos, células de suspensão, protoplastos, etc.) foi banhado no centro do prato com um diâmetro de 3 cm. .

2, o tratamento de pó de ouro

Pegue 60mg de pó de ouro ou pó de tungstênio em um tubo de centrífuga, adicione 1ml de etanol absoluto, agite bem por 3min, centrifugue 1rain a 9615g, remova o sobrenadante, adicione 1ml de água estéril e misture bem, centrifugue a 9615g, repita a etapa 3 acima. Vezes. Finalmente, o pó de ouro foi suspenso em 1 ml de água destilada estéril e armazenado a 4 ° C ou à temperatura ambiente.

3, processamento de DNA

Pegue a suspensão em pó de ouro 50tA, adicione a solução de 5º plasmídeo de DNA (1,0 / lg ~ 1), 50 // l

0,1 mol / L de espermidina (a solução utilizada foi estéril esterilizada), agitada durante 3 min, deixada à temperatura ambiente durante 10 min, centrifugada a 9615 g durante 10 s, rejeitar o sobrenadante; adicione 250 ~ 1 de etanol absoluto, agite para Centrífuga a 9615 g por 10 s e descarte o sobrenadante. O sedimento foi ressuspenso em 60/1 1 de etanol absoluto e usado para 5 injeções (10 a 1 por tiro).

4, o funcionamento da arma de gene

Todas as operações da arma do gene são realizadas sob condições assépticas, como segue:

1) Desinfete a superfície da pistola de genes e a câmara da amostra com etanol a 70%. Ao mesmo tempo, a rede de barreira e o disco clivável, o suporte micro-elástico, o seu suporte e a ferramenta de fixação foram embebidos durante 15 minutos com etanol a 70% e depois colocados num banco limpo para secar. O diafragma divisível, a cobertura fixa e o dispositivo de lançamento do transportador micro-elástico podem ser esterilizados à superfície com etanol a 70% e secos por sopro.

2) Insira a lâmina de micropartículas no anel de retenção e adicione uma mistura de DNA e pó de ouro no centro da lâmina de micropartículas e seque por cerca de 1 min.

3) Instale a membrana rompível no seu suporte e gire-a no sentido horário no acelerador de gás.

4) Instale o anel de espaço, a rede de bloqueio, o suporte da rede de bloqueio, o transportador de partículas e o anel de fixação (face com as partículas voltadas para baixo), aperte a tampa e insira-a na garra.

5) Coloque a amostra na câmara de bombardeamento e feche a porta.

6) Abra a válvula principal do cilindro de hélio e gire a válvula do regulador de hélio no sentido horário para que a indicação do ponteiro do manômetro seja maior que a pressão do diafragma 200Psi (= 1,379MPa).

7) Ligue a pistola de genes e o interruptor do transformador.

8) Pressione o botão de vácuo. Quando o vácuo estiver entre 26 e 28 pol Hg (= 88,05 ～ 94,82 kPa), pressione o botão Espera rapidamente, depois pressione e segure o botão de lançamento e mantenha-o até que ele seja ativado.

9) Pressione a chave de ventilação para redefinir a amostra depois que a mesa de vácuo tiver sido zerada.

10) Desligue.

Aperte o interruptor principal do cilindro de hélio, acerte uma pistola vazia, retorne o ponteiro do manômetro para zero, depois gire a válvula de ajuste do manômetro no sentido anti-horário; desligue o interruptor principal da pistola de genes e o interruptor do transformador.