Programa de preparação de amostra de DNA residual da célula hospedeira
May 21, 2021
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Drogas de proteína recombinante, drogas de anticorpos, vacinas e outros produtos em produtos biológicos são expressos e produzidos por linhas celulares contínuas. Embora tenham passado por processos de purificação rigorosos, ainda podem haver fragmentos de DNA de células hospedeiras residuais (rDNA) nos produtos.
Esses rDNA podem afetar a função dos genes-chave do receptor, trazendo assim o risco de infecção ou tumorigenicidade.
Portanto, como obter o rDNA de rastreamento de forma eficiente e estável na amostra é particularmente importante. No momento, existem principalmente os seguintes métodos:
| Métodos | Vantagem | Desvantagem |
| Fenol / clorofórmio | Alta pureza de DNA e alto conteúdo | Etapas demoradas, complicadas e tóxicas |
| Precipitação de iodeto de sódio | fácil de usar | Conteúdo de DNA demorado e instável |
| Método de coluna | Simples e de alta pureza | É demorado e difícil de automatizar |
| Método Magnetic Bead | Simples, de alta pureza, pode ser automatizado | - |
![NP-2032[1]](/Content/uploads/2021213197/20210522104030d04d958e72634ed5a62eff19fd61da6f.png "NP-2032[1]") |
Este esquema de tratamento é baseado no princípio do método do grânulo magnético e é utilizado no sistema de pré-tratamento de rDNA de produtos biológicos, que pode realizar um sistema de pré-tratamento eficiente, simples e automatizado.
O instrumento de extração automática de ácido nucleico SCIENTZ é equipado com uma marca bem conhecida de kit de pré-tratamento de amostra de DNA residual de célula hospedeira (método de esfera magnética), e a taxa de recuperação de várias amostras é estável até mais de 80%, o que pode controlar de forma estável e eficaz o conteúdo residual de DNA da célula hospedeira em vários produtos biológicos
Programa experimental
Materiais experimentais: instrumento de extração automática de ácido nucleico (NP-2032), instrumento de PCR quantitativo fluorescente (LightCycler480), kit de pré-tratamento de amostra de DNA residual de célula hospedeira (método de esfera magnética), kit de detecção de número de cópia de gene CAR / TCR (PCR multiplex - método de sonda de fluorescência )
Amostras experimentais: amostras de retrovírus, amostras de células CAR-T, controle negativo
Passos experimentais:
Para monitorar.
Preparação do experimento - preparação da amostra - preparação da extração - início do programa - detecção do conteúdo residual total
Observações: O instrumento funciona por cerca de 30 minutos
Resultados experimentais:
| Nome da amostra | MeanCp | MeanConc | Quantia recuperada | Escalar | Taxa de recuperação |
| Controle negativo | 36.43 | 0.00 | - | - | - |
| Controle negativo + (portátil) | 18.67 | 86.62 | 8662.15 | 9707.85 | 89% |
| Controle negativo | 18.72 | 53.47 | 8020.723657 | 9868.821045 | 81% |
| Amostra de vírus + | 19.15 | 63.10 | 8194.27 | 9707.85 | 84% |
| Amostra de célula | 20.21 | 32.93 | 2811.241943 | 2740.516576 | 102% |
Resultados experimentais:
O processamento automatizado de diferentes amostras tem resultados estáveis e eficientes;
A eficiência da automação do processamento em lote é maior do que a eficiência da extração manual;
Atende aos requisitos da nova taxa de recuperação da USP; pode ser um bom assistente para o pré-processamento da detecção de rDNA em produtos biológicos.
Exibição do produto:
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